Melittin-induced metabolic changes on the Madin-Darby Bovine Kidney cell line / [Mudanças metabólicas induzidas por melitina em células da linhagem Madin-Darby Bovine Kidney]

In this study, the toxic effects of melittin on Madin-Darby Bovine Kidney cells (MDBK) were analyzed with respect to mitochondrial functionality by reduction of MTT and flow cytometry, apoptosis potential, necrosis, oxygen reactive species (ROS) production, lipid peroxidation, and DNA fragmentation using flow cytometry and cell membrane destabilization by confocal microscopy. The toxicity presented dose-dependent characteristics and mitochondrial activity was inhibited by up to 78.24 ±3.59% (P<0.01, n = 6) in MDBK cells exposed to melittin (10µg/mL). Flow cytometry analysis revealed that melittin at 2µg/mL had the highest necrosis rate (P<0.05) for the cells. The lipoperoxidation of the membranes was also higher at 2µg/mL of melittin (P<0.05), which was further confirmed by the microphotographs obtained by confocal microscopy. The highest ROS production occurred when the cells were exposed to 2.5µg/mL melittin (P<0.05), and this concentration also increased DNA fragmentation (P<0.05). There was a significative and positive correlation between the lipoperoxidation of membranes with ROS (R=0.4158), mitochondrial functionality (R=0.4149), and apoptosis (R=0.4978). Thus, the oxidative stress generated by melittin culminates in the elevation of intracellular ROS that initiates a cascade of toxic events in MDBK cells.(AU)

Neste estudo, os efeitos tóxicos da melitina em células Madin-Darby Bovine Kidney (MDBK) foram analisados quanto à funcionalidade mitocondrial, por redução de MTT e citometria de fluxo, potencial de apoptose, necrose, produção de espécies reativas de oxigênio (ROS), peroxidação lipídica e fragmentação de DNA, utilizando-se citometria de fluxo e desestabilização da membrana celular, por microscopia confocal. A toxicidade apresentou características dose-dependentes e a atividade mitocondrial foi inibida até 78,24±3,59% (P<0,01, n = 6) em células MDBK expostas à melitina (10µg/mL). Análises por citometria de fluxo revelaram que a melitina a 2µg/mL apresentou o maior índice necrótico celular (P<0,05). A maior lipoperoxidação de membranas também foi na concentração de 2µg/mL de melitina (P<0,05), o que foi posteriormente confirmado por microscopia confocal. A maior produção de ROS aconteceu quando as células foram expostas a 2,5µg/mL de melitina (P<0,05), e essa concentração também aumentou a fragmentação de DNA (P<0,05). Houve uma significativa correlação positiva entre a lipoperoxidação de membranas e a produção de ROS (R=0,4158), funcionalidade mitocondrial (R=0,4149) e apoptose (R=0,4978). Portanto, o estresse oxidativo gerado pela melitina culminou na elevação de ROS intracelular, que inicia uma cascata de eventos tóxicos nas células MDBK.(AU)

Apamin-induced alterations in J774 1. 6 macrophage metabolism / [Alterações induzidas por apamina no metabolismo de macrófagos J774 1. 6]

Among the immune system cells, macrophages have an important role. Apamin, a bee venom constituent, is important in the defense of these insects. Thus, we aimed to evaluate the metabolism of J774 1.6 macrophage cell line when exposed to isolated and purified apamin, using cytotoxicity tests by MTT reduction and analysis by flow cytometry (apoptosis / necrosis, production of reactive oxygen species (ROS), membranous lipoperoxidation (LPO), electrical potential of the mitochondrial membrane (mMP) and DNA fragmentation). None of the tested concentrations (10 to 100µg/mL) were cytotoxic according to MTT reductions. Apoptosis rates decreased at concentrations of 2.5, 5.0, and 10.0µg/mL (P<0.05), while necrosis rates increased (P<0.05). However, rates of healthy cells at the highest tested concentration (10µg/mL) did not differ from control (P>0.05). Apamin did not alter ROS, LPO, or DNA fragmentation. Therefore, all analyzed concentrations (1.25 to 10µg/mL) decreased mMP. Such decrease in apoptosis might be due to a suppression of mitochondrial pro-apoptotic messengers, as this peptide causes no oxidative stress, lipid peroxidation, and DNA damage. Highly sensitive techniques are majorly important for proper interpretation of cellular toxicity mechanisms, combined with routine laboratory methods.(AU)

Das células do sistema imunológico, macrófagos desempenham um papel fundamental. Apamina, constituinte do veneno de abelhas, é importante na defesa destas. Objetivou-se avaliar o metabolismo da linhagem de macrófagos J774 1.6 expostos à apamina isolada e purificada, avaliando-se citotoxicidade por redução de MTT e análise por citometria de fluxo (apoptose / necrose, produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), lipoperoxidação membranosa (LPO), potencial elétrico da membrana mitocondrial (MMP) e fragmentação do DNA). Nenhuma concentração testada (10 a 100µg / mL) foi citotóxica. As taxas de apoptose diminuíram nas concentrações 2,5, 5,0 e 10,0µg / mL (P<0,05), enquanto as de necrose aumentaram (P<0,05). Entretanto, as taxas de células saudáveis na maior concentração testada (10µg / mL) não diferiram do controle (P>0,05). A apamina não alterou as ERO, a LPO nem a fragmentação do DNA. Portanto, todas as concentrações analisadas (1,25 a 10µg / mL) diminuíram a mMP. Tal diminuição na apoptose pode ser por uma supressão de mensageiros pró-apoptóticos mitocondriais, já que este peptídeo não causa estresse oxidativo, peroxidação lipídica nem dano ao DNA. Técnicas altamente sensíveis são importantes para adequada interpretação dos mecanismos de citotoxicidade.(AU)

Infecção latente pelo herpesvírus bovino tipo 1 em búfalos (Bubalus bubalis) no Rio Grande do Sul / Bovine herpesvirus type 1 latent infection in buffalo (Bubalus bubalis) in Rio Grande do Sul

Apesar dos bovinos serem considerados os hospedeiros naturais do BoHV-1, estudos sorológicos têm sugerido que búfalos podem ser suscetíveis ao BoHV-1 e a outros alfa-herpesvírus geneticamente relacionados. O objetivo deste estudo foi detectar a presença de DNA viral de BoHV-1 em 202 amostras de gânglios trigêmeos de búfalos, pela técnica de semi-nested PCR, para detecção de um segmento do gene codificante da glicoproteína D (gD) do BoHV-1. Além disso, 242 amostras de soro foram analisadas pela técnica de soroneutralização (SN) para a detecção de anticorpos neutralizantes contra BoHV-1, BoHV-5 e BuHV. Todas as amostras clínicas foram coletadas em um matadouro na cidade de Pelotas, RS, Brasil. O DNA de BoHV-1 foi detectado em 61 (30,1%) gânglios, e os resultados da SN demonstraram que 27,6% dos animais apresentaram anticorpos contra, pelo menos, um dos vírus testados. O sequenciamento genômico e a análise de 14 amplicons confirmaram a presença do DNA do BoHV-1 nos tecidos analisados. Em resumo, os resultados indicam que o BoHV-1 está distribuído em rebanhos bubalinos provenientes da região Sul do Brasil. Entretanto, são necessárias investigações adicionais, no sentido de elucidar o papel exato dos búfalos na epidemiologia das infecções pelo BoHV-1.(AU)

Although bovines are natural hosts for BoHV-1, serologic studies in several countries have suggested that buffaloes (Bubalus bubalis) may be susceptible to BoHV-1 and other genetically related alphaherpesvirus. This study aimed to investigate the presence of BoHV-1 DNA in trigeminal ganglia from 202 buffaloes by a semi-nested PCR to amplify partially the glycoprotein D (gD) gene of BoHV-1. Additionally, 242 serum samples were tested by serum neutralization (SN) for the detection of antibodies against BoHV-1, BoHV-5 and BuHV. All clinical samples were collected in a slaughterhouse located in Pelotas, RS, Brazil. BoHV-1 DNA was detected in 61 (30.1%) of the samples and SN revealed 27.6% of the animals with neutralizing antibodies against at least one of the tested viruses. Nucleotide sequencing of 15 amplicons followed by BLAST analysis confirmed the presence of BoHV-1 DNA in the analyzed tissues. Taken together, these data indicate that BoHV-1 infection is distributed in buffaloes in southern Brazil. However, the role of buffaloes in the BoHV-1 epidemiology needs further investigation.(AU)

Chemical and cytotoxic analyses of three varieties of Brazilian propolis (green propolis, jataí propolis and brown propolis) and its anti-Sporothrix brasiliensis in vitro activity / [Análises químicas e citotóxicas de três variedades de própolis brasileiras (própolis verde, própolis jataí e própolis marrom) e sua atividade in vitro anti-Sporothrix brasiliensis]

In this study, we described the antifungal activity of three Brazilian propolis extracts: brown, green and from jataí bees against Sporothrix brasiliensis. The extracts were obtained from ethanolic extraction and their chemical composition was determined by high-performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry. The cellular toxicity was measured in MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney) cells and quantified by the MTT assay (3- (4,5 dimethylthiazol-2yl -2,5-diphenyl-2H bromine tetrazolato). For antifungal activity, the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC) were determined by broth microdilution. The results showed that cell toxicity was not observed at lower concentrations (0.097 to 0.39μg/ml) for all extracts in comparison to cell control. Among the chemical compounds identified, caffeic acid, p-coumaric acid, chlorogenic acid, ferulic acid and rutin were quantified. In antifungal activity, green and jataí did not exhibit activity against the isolates (MIC and MFC greater than 0.78mg/ml). However, all isolates of S. brasiliensis were sensitive to brown propolis (MIC of 0.09 to 0.78mg/ml), including the standard strain (P<0.001). Among the Brazilian propolis studied, the brown propolis showed activity against the S. brasiliensis isolates and more studies should be undertaken in order to evaluate its promising use in the treatment of sporotrichosis.(AU)

Neste estudo, descreveu-se a atividade antifúngica de três extratos de própolis brasileiras: marrom, verde e de abelhas jataí (Tetragonisca angustula), contra Sporothrix brasiliensis. Os extratos foram obtidos de extração etanólica, e a sua composição química foi determinada por cromatografia líquida de alta eficiência, acoplada à espectrometria de massa. A toxicidade celular foi medida em células MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney), avaliada por observação microscópica e quantificada pelo ensaio MTT (3- (4,5-dimetiltiazol-2-ilo -2,5-difenil-2H bromo tetrazolato). Para a atividade antifúngica, determinou-se a concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração fungicida mínima (CFM) por meio de microdiluição em caldo. Os resultados mostraram que a toxicidade celular não foi observada em concentrações menores (0,097 a 0,39μg/ml). Entre os compostos químicos identificados, foram quantificados o ácido cafeico, ácido p-cumárico, ácido clorogênico, ácido ferúlico e a rutina. Na atividade antifúngica, as própolis verde e jataí não apresentaram atividade contra os isolados (CIM e CFM maior que 0,78mg/ml), porém todos os isolados de S. brasiliensis foram sensíveis à própolis marrom (CIM de 0,09 a 0,78mg/ml), incluindo a cepa padrão (P<0,001). Entre as própolis brasileiras estudadas, a marrom mostrou atividade contra S. brasiliensis, e mais estudos devem ser realizados para avaliar seu uso promissor no tratamento da esporotricose.(AU)

Saccharomyces boulardii modulates and improves the immune response to Bovine Herpesvirus type 5 Vaccine / Saccharomyces boulardii modula e melhora a resposta imune de vacina contra o Herpes bovino tipo 5

There have been significant efforts towards the development of more efficient vaccines for animal health. A strategy that may be used to improve vaccine efficacy is the use of probiotics to enhance the immune response of the host, leading to increased immunogenicity of antigen preparations. Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is an example of an important animal pathogen for which vaccines have provided only limited protection. In this study, we examined the use of the probiotic Saccharomyces boulardii (Sb) as a potential adjuvant to improve vaccine efficiency. We found that the supplemented animals exhibited an enhanced systemic IgG antibody response toward a Th1 response in favor of IgG2a and increased mRNA expression levels of the cytokines IFN-y, IL-12, IL-17 and IL-10 in the spleen. These results suggest that Sb supplementation may provide a promising means for improving the efficiency of vaccines, particularly those that rely on a cell-mediated immune response.(AU)

Esforços significativos têm sido realizados para o desenvolvimento de vacinas mais eficientes em saúde animal. Uma estratégia que pode ser usado para melhorar a eficácia da vacina é o uso de probióticos para melhorar a resposta imune do hospedeiro, conduzindo ao aumento da imunogenicidade de preparações de antígenos. Herpesvírus bovino 5 (BoHV-5) é um exemplo de um importante patógeno animal para os quais vacinas têm fornecido apenas uma protecção limitada. Neste estudo, examinou-se o uso do probiótico Saccharomyces boulardii (Sb) como um adjuvante potencial para melhorar a eficiência da vacina. Verificou-se que os animais suplementados apresentaram uma produção de anticorpos IgG superior e com desvio para Th1 em favor de IgG2, além do aumento dos níveis de expressão de mRNA para as citocinas IFN-γ, IL-12, IL-17 e IL-10. Esses resultados sugerem que a suplementação de Sb pode fornecer um meio promissor para melhorar a eficiência de vacinas, particularmente aquelas que dependem de uma resposta imune mediada por células.(AU)

Ocorrência do subtipo B do vírus da imunodeficiência felina em gatos domésticos da região sul do estado do Rio Grande do Sul, Brasil / Occurrence of subtype B of the feline immunodeficiency virus in domestic cats from the south region of Rio Grande do Sul state, Brazil

No Brasil existem poucos estudos sobre a ocorrência da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV), assim como a determinação dos subtipos circulantes, o que é indispensável para o desenvolvimento de vacinas e novos testes diagnósticos. O presente trabalho investigou a ocorrência da infecção pelo FIV entre os anos de 2010 e 2011 em gatos domésticos submetidos a atendimento clínico na cidade de Pelotas e região. Amostras de sangue total de 70 animais, incluindo suspeitos (28) ou não suspeitos (42) da infecção pelo FIV, foram submetidas à reação de PCR nested. Os resultados indicaram uma frequência de infecção de 15,7% (11/70) e a análise dos fatores associados (sexo, idade e condição clínica) evidenciou uma maior ocorrência em gatos com idade superior a 10 anos e acometidos por infecções crônicas e recidivantes. Oito amostras positivas na PCR nested foram submetidas a sequenciamento genômico e somente o subtipo B foi detectado na região estudada.

In Brazil there are few studies on the occurrence of the feline immunodeficiency virus (FIV) infection and its subtypes, which are essential for the development of vaccines and new diagnostic tests. The present study investigated the occurrence of the FIV infection between 2010 and 2011 in domestic cats submitted to medical attendance in the city of Pelotas and nearby area. Total blood samples of seventy cats, suspected (28) or not (42) of infection by FIV were analyzed by nested PCR in order to perform a diagnosis. The results pointed to a FIV infection frequency of 15.7% (11/70) and the analysis of the risk factors related to infection (sex, age and clinical condition) evidenced a greater occurrence in cats up to 10 years of age with chronic and recurrent infections. Eight samples found positive by nested PCR were submitted to DNA sequencing indicating that only the subtype B was detected in the studied region.

Frequência de staphylococcus aureus em casos de mastite bovina subclínica, na região sul do Rio Grande do Sul / Staphylococcus aureus frequency of subclinical bovine mastitis in southern Rio Grande do Sul

A mastite bovina é uma doença importante na exploração leiteira, não apenas pelas perdas econômicas diretas que promove, mas também pelas perdas indiretas e o potencial risco à saúde pública. Dentre as principais causas de infecções intramamárias, destacam-se as bactérias do gênero Staphylococcus spp., sendo que Staphylococcus aureus é o agente etiológico predominante em mastite subclínica. O objetivo desse trabalho foi verificar a frequência de mastite subclínica em oito rebanhos localizados na região Sul do Rio Grande do Sul (Brasil) e a relação da enfermidade com a presença de S. aureus. Adicionalmente, pesquisou-se a presença de S. intermedius e S. hyicus nas amostras de leite obtidas. Para identificação da doença, utilizou-se o California Mastitis Test (CMT). A identificação da espécie de Staphylococcus spp. foi feita em meio de cultura ágar Baird-Parker, com posterior confirmação das colônias suspeitas em coloração de gram, prova de catalase, pesquisa de coagulase livre e pesquisa de termonuclease. A mastite subclínica foi constatada em 53,6% dos animais testados. A presença de Staphylococcus coagulase positiva foi identificada em 12,6% dos animais com mastite subclínica. Nesses mesmos animais, a bactéria identificada como S. aureus foi o agente etiológico presente em 17,6% dos casos. Adicionalmente, pode-se perceber que, dentre o grupo identificado como coagulase positiva, 85,7% corresponderam a S. aureus, enquanto8,5% mostraram características bioquímicas compatíveis com S. intermedius e 5,8% foram consideradas S. hyicus...

Bovine mastitis is an important disease in dairy farming, not only by promoting direct economic losses, but also for indirect losses and the potential risk to public health. The main causes of intramammary infections include the bacteria of the genus Staphylococcus spp., Staphylococcus aureus being the predominant etiologic agent in subclinical mastitis. The aim of this study was to determine the frequency of subclinical mastitis in eight herds from southern Rio Grande do Sul (Brazil) and the relationship of the disease with the presence of S. aureus. In addition, we checked for the presence of S. intermedius and S. hyicus in the milk samples obtained. For identification of the disease, we used the California Mastitis Test (CMT). Identification of Staphylococcus spp. species was made in Barid-Parker agar culture medium, with subsequent confirmation of suspected colonies by way of Gram stain and catalase test along with free-coagulase and thermonuclease research. Subclinical mastitis was identified in 53.6% of animals tested. The presence of coagulase-positive Staphylococcus was identified in 12.6% of animals with subclinical mastitis. In these same animals, bacteria identified as S. aureus were the etiologic agent present in 17.6% of cases. Additionally, it was revealed that among the group identified as coagulase positive, 85.7% corresponded to S. aureus, while 8.5% had biochemical characteristics consistent with S. intermedius and 5.8% were considered S. hyicus...

Serum survey for antibodies to coronavirus, herpesvirus, calicivirus, and parvovirus in domestics cats from Rio Grande do Sul, Brazil / Inquérito sorológico para anticorpos contra coronavírus, herpesvírus, calicivírus e parvovírus em gatos domésticos do Rio Grande do Sul, Brasil

A ocorrência da infecção por coronavírus felino (FCoV), herpesvírus felino tipo 1 (FHV-1), calicivírus felino (FCV) e parvovírus felino (FPV) foi investigada mediante a detecção de anticorpos no soro de 97 gatos domésticos de Pelotas, RS, pelo teste de soro-neutralização. Entre os animais estudados, 51 não eram vacinados, 11 haviam sido vacinados contra FHV-1, FCV e FPV com pelo menos uma dose, e 35 tinham histórico de vacinação desconhecido. Foram detectados anticorpos para o FCoV em 75,2% (73/97) dos gatos. Anticorpos contra o FHV-1 estavam presentes em 38,1% (37/97): 73% (8/11) dos gatos vacinados, 39,2% (20/51) dos não vacinados e 25,7% (9/35) dos gatos com histórico de vacinação desconhecido. Anticorpos para o FCV estavam presentes em 56,7% (55/97): 81,8% (9/11) dos gatos vacinados, 52,9% (27/51) dos não vacinados, e 54,3% (19/35) dos gatos com histórico de vacinação desconhecido. Para o FPV, havia anticorpos em 69,1% (67/97): 100% (11/11) dos vacinados, 66,6% (34/51) dos não vacinados e 62,8% (22/35) dos gatos com histórico de vacinação desconhecido. Os resultados sugerem alta exposição ao FCoV, FHV-1, FCV e FPV na população de gatos na área estudada.

Níveis de anticorpos contra o vírus da cinomose canina e o parvovírus canino em cães não vacinados e vacinados / Antibodies levels against canine distemper virus and canine parvovirus in vaccinated and unvaccinated dogs

Antibody titres to canine distemper virus (CDV) and canine parvovirus (CPV) were measured in 132 dogs: 80 had been vaccinated at least once, 22 had not been vaccinated, and 30 had unknown vaccination history. Serum antibody titers were measured by means of serum neutralization (CDV) or hemagglutination inhibition (CPV). Serum CDV titers >20 and serum CPV titers >80 were considered protective. Protective antibodies to CDV were present in 40.1 percent of the population: 39.8 percent of the vaccinated dogs, 31.8 percent unvaccinated, and in 46.6 percent of the dogs with unknown vaccination history. Protective antibodies to CPV were present in 90.9 percent of the dogs: 93.7 percent of the vaccinated dogs, 90.9 percent of the unvaccinated, and 83.3 percent of the dogs with unknown vaccination history.

Efecto de dosis altas de budesonida y función suprarrenal de niños asmáticos severos / High doses of inhaled budesonide and adrenal function in children with severe asthma

Background: The use of inhaled steroids is common in the treatment of bronchial asthma in children. Aim: To assess adrenocortical function in children with severe asthma receiving inhaled budesonide for six or more months. Material and methods: Children with severe asthma that required 800 µg/day or more of inhaled budesonide and that did not required systemic steroids for more than six days in the last four months to control their disease, were studied. Serum cortisol was measured one hour after administration of 0.25 mg of ACTH (Cosyntropin®) intravenously. The test was considered normal if post stimulation serum cortisol was over 18 µg/ml. Results: Twenty children (aged 5 to 14 years, 15 males), were studied. The stimulation test was normal in 17 children. Conclusions: Alterations in adrenal function are present in a small proportion of asthmatic children who require 800 µg/day of inhaled budesonide.

Densitometría ósea en niños leucémicos al completar el primer mes de quimioterapia / Bone mineral density in leukemic children after completing one month of chemotherapy

Background: An important loss of bone mineral density, associated to pain and fractures, has been reported in children with acute lymphoblastic leukemia (ALL). Aim: To measure bone mineral density among children with acute lymphoblastic leykemia (ALL) that completed the remission induction phase with chemotherapy, that lasts 30 days. Patients and methods: children with ALL, admitted to the oncology unit of a general hospital were considered eligible for the study. body composition and bone mineral density were measured by dual energy x ray absorptiometry (DEXA). each child with ALL was paired with a healthly control. Results: Fourteen children age 1 to 11 years, completed the study, Spine and femoral bone mineral desities were significantly lower than in their matched controls. No differences in total body bone mineral density or content were observed. Children with ALL had a lower fat free mass and a higher fat mass than their matched controls. There was a significant correlation between fat free mass and bone mineral content. Conclusions: After one month of chemotherapy, children with ALL had a lower bone mineral density in the spine and femur and a lower fat free mass.

Densidad mineral ósea en escolares nacidos prematuros / Bone mineral density in school age children born preterm

The age at which children born preterm normalize their bone mineral density, is not well known. Aim: To study if children born preterm have normalized their bone mineral density at age 5 to 7 years. Patients and methods: Twenty six infants born preterm (14 male), were studied at age 5 to 7 years. Birth weight, present weight and height, bone age, calcium and phosphate intake at the first year of life and at the current age were assessed. Bone mineral density was measured by single photon X ray absorptiometry in the dominant forearm. A blood sample was obtained to measure insulin growth factor 1 (IGF-1). As a control group, 105 healthy age-paired infants born at term, were studied. Results: Bone mineral density was significantly lower in infants born preterm than in their term counterparts (0.273±0.01 g/cm2 and 0.302±0.01 g/cm2 respectively, p <0.001). There was a positive correlation between bone mineral density and IGF-1 (r=0.49, p=0.01). No correlation with the other measured parameters was observed. Conclusions: Infants that were born preterm have a lower bone mineral density at 5 to 7 years of age than their term controls. Bone mineral density correlates with IGF-1 (Rev Méd Chile 2003; 131: 1289-94).

Intoxicacao por metoclopramida. / Intoxication by metoclopramide

Sao analisados 13 casos de intoxicacao por metoclopramida, internados na Emergencia do Hospital da Crianca Santo Antonio, no periodo de janeiro de 1981 a dezembro de 1982. Sao considerados a dose, a via de administracao, o tempo de inicio dos sintomas e as manifestacoes clinicas. E enfatizado o cuidado necessario quanto a via de administracao e, principalmente, a dose maxima, que nao deve exceder a 0,5mg/kg/ dia.